Главная
Случайная страница
Полезное:
Как сделать разговор полезным и приятным
Как сделать объемную звезду своими руками
Как сделать то, что делать не хочется?
Как сделать погремушку
Как сделать так чтобы женщины сами знакомились с вами
Как сделать идею коммерческой
Как сделать хорошую растяжку ног?
Как сделать наш разум здоровым?
Как сделать, чтобы люди обманывали меньше
Вопрос 4. Как сделать так, чтобы вас уважали и ценили?
Как сделать лучше себе и другим людям
Как сделать свидание интересным?
Категории:
АрхитектураАстрономияБиологияГеографияГеологияИнформатикаИскусствоИсторияКулинарияКультураМаркетингМатематикаМедицинаМенеджментОхрана трудаПравоПроизводствоПсихологияРелигияСоциологияСпортТехникаФизикаФилософияХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника
|
Перечень практических навыков по микробиологии (станции) для проведения второго этапа итогового контроля в виде ОСПЭ
Кафедра микробиологии, вирусологии им. Ш.И. Сарбасовой
1. Приготовление нефиксированного мазка
| 2. Приготовление фиксированного мазка
| 3. Окраска по граму
| 4. Окраска капсул по Бурри-Гинс
| 5. Окраска мазка по Ожешко
| 6. Окраска по методу Циля Нильсена
| 7. Микроскопическое исследование
| 8. Выделение чистой культуры по способу Дригальского
| 9. Выделение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху)
| 10. Выделение чистой культуры анаэробов (метод Фортнера)
| 11. Выделение чистой культуры аэробов (1 - 2 день исследования)
| 12. Выделение чистой культуры аэробов (3 - 4 день исследования)
| 13. Выделение чистой культуры анаэробов (1-2 день исследования)
| 14. Выделение чистой культуры анаэробов (3-4-й день исследования)
| 15. Определение чувствительности к антибиотикам диско-диффузионным методом
| 16. Ориентировочная агглютинация на стекле
| 17. Развернутая реакция агглютинации при бруцеллезе (реакция Райта)
| 18. Реакция связывания комплемента (РСК) – реакция Вассермана
| 19. Реакция иммунофлюоресценции (риф) при диагностике хламидийной инфекции
| 20. РПГА при определении HBs антигена вируса гепатита В
| 21. ИФА определение антител против Вич
| 22. Постановка аллергической пробы в диагностике туберкулеза | 23. Забор проб испражнений для исследования на патогенную флору | 24. Забор проб испражнений для исследования на дисбактериоз | 25. Забор отделяемого открытых инфицированных ран для микробиологических исследований | 26. Забор мочи для микробиологических исследований | 27. Посев крови на стерильность
| Станция 1 «ПРИГОТОВЛЕНИЕ НЕФИКСИРОВАННОГО МАЗКА»
Шаг 1
Взять обезжиренное предметное стекло. Ограничить зону мазка, нарисовав стеклографом кружок
| Шаг 2
Стерильной пастеровской пипеткой нанести 1 каплю стерильного физиологического раствора на предметное стекло
| Шаг 3
Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки
| Шаг 4
Остуженной стерильной бактериальной петлей произвести отбор исследуемой колонии
| Шаг 5
Внести отобранную колонию в физ.раствор, хорошо перемешать
| Шаг 6
Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки и поставить в штатив
| Шаг 7
Подсушить препарат в потоке теплого воздуха над пламенем горелки.
| Шаг 8
Нанести на мазок 1 каплю иммерсионного масла.
|
Станция 2 «ПРИГОТОВЛЕНИЕ ФИКСИРОВАННОГО МАЗКА»
Шаг 1
На поверхности обезжиренного стекла карандашом нарисовать кружочек
| Шаг 2
В кружок пипеткой внести 1 каплю физиологического раствора
| Шаг 3
Бактериологическую петлю простерилизовать над пламенем горелки, остудить, взять с поверхности агара культуру, внести в каплю физиологического раствора, размешать круговыми движениями.
| Шаг 4
Бактериологическую петлю простерилизовать, поставить в штатив.
| Шаг 5
Пинцетом взять предметное стекло и просушить в теплой струе воздуха высоко над пламенем горелки.
| Шаг 6
Препарат зафиксировать, опуская в пламя горелки на 1 сек. 3 раза
| Шаг 7
Нанести на мазок 1 каплю иммерсионного масла, микроскопировать
| Станция 3 «Окраска по Граму»
Шаг 1
На мазок, фиксированный над пламенем горелки, кладут фильтровальную бумагу, пропитанную генцианвиолетом и наносят несколько капель воды. Прокрашивание 1-2 минуты.
| Шаг 2
Снимают бумагу, сливают остаток красителя и, не промывая препарат водой, наливают раствор Люголя на 1-2 мин до почернения препарата.
| Шаг 3
Раствор Люголя сливают. Для обесцвечивания на мазок капают несколько капель этилового спирта, 30 секунд -1 мин.
| Шаг 4
Препарат тщательно промывают водопроводной водой.
| Шаг 5
Препарат докрашивают водно-спиртовым раствором фуксина в течение 2 минут.
| Шаг 6
Препарат тщательно промывают водопроводной водой, промокая фильтровальной бумагой.
| Шаг 7
Микроскопия. На высушенный окрашенный мазок-препарат наносят каплю иммерсионного масла и смотрят под увеличением объектива 90-100.
| Шаг 8
Результаты окраски. Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет, грамотрицательные бактерии - в ярко-малиновый цвет.
| Станция 4 «Окраска капсул по Бурри-Гинс»
Шаг 1
На обезжиренное предметное стекло наносят каплю туши
| Шаг 2
Простерилизовать бактериальную петлю
| Шаг 3
Стерильной бактериальной петлей произвести отбор исследуемой колонии
| Шаг 4
Внести отобранную колонию в каплю туши, гомогенизировать
| Шаг 5
Препарат высушивают на воздухе и фиксируют метиловым спиртом или смесью Никифорова.
| Шаг 6
Промывают водой
| Шаг 7
Окрашивают карболовым фуксином Циля, 3-5 мин
| Шаг 8
Промывают водой, высушивают при комнатной температуре
| Шаг 9
Микроскопия с иммерсионной системой
| Шаг 10
Результаты окраски. Фон препарата темный, микробные тела окрашиваются в красный цвет, а окруженная ее капсула не окрашиваются тушью, остаются бесцветными
| Станция 5 «ОКРАСКА МАЗКА ПО ОЖЕШКО»
Шаг 1
На нефиксированный мазок наносят 0,5 % р-р HCI и подогревают над племенем горелки в течение 1-2 мин, после чего остатки кислоты сливают
|
| Шаг 2
Промывают водой, подсушивают и фиксируют над пламенем горелки.
|
| Шаг 3
Препарат покрывают фильтровальной бумагой и наносят карболовый фуксин Циля. Удерживая стекло пинцетом, препарат подогревают над пламенем горелки до отхождения паров. Добавляют новую порцию красителя и подогревают еще paз.
|
| Шаг 4
После охлаждения снимают бумагу и промывают препарат водой.
|
| Шаг 5
Препарат обесцвечивают 5% р-ом серной кислоты, наливая кислоту на стекло.
|
| Шаг 6
Препарат несколько раз промывают водой.
|
| Шаг 7
Окрашивают водно-спиртовом раствором метиленового-синего в течение 3-5мин.
|
| Шаг 8
Препарат промывают водой и высушивают, промокая фильтровальной бумагой.
|
| Шаг 9
Нанести на мазок 1 каплю иммерсионного масла.
|
| Шаг 10
Результат: Споры принимают ярко-красный цвет фуксина. Вегетативное тело бактерии, обесцвеченной серной кислотой, окрашивается дополнительной краской в синий цвет.
|
| Станция 6 «окраска по методу Циля Нильсена»
Шаг 1
На фиксированный мазок накладывают белую фильтровальную бумагу и наливают карболовый фуксин Циля. Препарат 2-3 раза подогревают в пламени до появления паров.
| Шаг 2
Препарат промывают дистиллированной водой, бумагу сбрасывают пинцетом в ванночку для отходов.
| Шаг 3
Вносят пипеткой несколько капель на поверхность мазка 5% раствора серной кислоты на 2-4 сек.
| Шаг 4
Промывают дистиллированной водой
| Шаг 5
Вносят пипеткой несколько капель синьки Леффлера. Время окраски 3-5 минут
| Шаг 6
Промывают дистиллированной водой, высушивают фильтровальной бумагой.
| Шаг 7
Нанести 1 каплю иммерсионного масла, микроскопировть. Учет результатов: на голубом фоне будут видны палочковидной формы бактерии красного цвета
|
Станция 7 «МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ»
Шаг 1
на приготовленный и окрашенный мазок на предметном стекле нанести каплю иммерсионного масла и поместить его на предметный столик, укрепив зажимами;
| Шаг 2
повернуть револьвер до отметки иммерсионного объектива Х100;
| Шаг 3
осторожно опустить тубус микроскопа до погружения объектива в каплю масла;
| Шаг 4
установить ориентировочный фокус при помощи макрометрического винта;
| Шаг 5
провести окончательную фокусировку препарата микроскопическим винтом, вращая его в пределах только одного оборота.
| Станция 8 «Выделение чистой культуры по способу Дригальского»
Шаг 1
Взять три чашки Петри с питательной средой, промаркировать 1,2,3.
| Шаг 2
Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки.
| Шаг 3
Стерильной бактериальной петлей взять каплю исследуемого материала.
| Шаг 4
В первую чашку Петри вносят каплю материала и стерильным шпателем втирают его в поверхность питательной среды.
| Шаг 5
Не прожигая шпателя и не набирая нового материала, шпатель переносят во 2-ю чашку Петри и втирают в поверхность питательной среды.
| Шаг 6
Не прожигая шпателя и не набирая нового материала, шпатель переносят в 3-ю чашку Петри и втирают в поверхность питательной среды.
| Шаг 7
Инкубация в термостате при 370С в течение 18-24 часов.
| Шаг 8
Результат. Большее количество колоний вырастает в 1-2-й чашках, изолированные колонии – в 3-ей чашке.
| Станция 9 «Выделение чистой культуры методом рассева в глубине среды (по Коху)»
Шаг 1
Взять три пробирки с 15 мл расплавленным мясо-пептонным агаром, 3 стерильные чашки Петри, промаркировать 1,2,3.
| Шаг 2
Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки.
| Шаг 3
Стерильной бактериальной петлей взять каплю исследуемого материала.
| Шаг 4
В первую пробирку вносят каплю материала и вращают несколько раз, зажав между ладонями.
| Шаг 5
Прокаленной и остуженной бактериальной петлей содержимого 1-й пробирки переносят во 2-ю пробирку, гомогенизируют вращательными движениями.
| Шаг 6
Прокаленной и остуженной бактериальной петлей содержимого 2-й пробирки переносят в 3-ю пробирку, гомогенизируют вращательными движениями.
| Шаг 7
Приготовленные разведения микробов выливают из пробирок в пронумерованные стерильные чашки Петри, соответствующим номерам пробирок.
| Шаг 8
Инкубация в термостате при 370С в течение 18-24 часов.
| Шаг 9
Результат. Большее количество колоний вырастает в 1-2-й чашках, изолированные колонии – в 3-ей чашке.
| Станция 10 «Последовательность этапов выделения чистой культуры анаэробов (метод Фортнера)»
Шаг 1
Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки.
| Шаг 2
Бактериальной петлей разделить среду на две половинки по середине кровяного сахарного агара
| Шаг 3
Стерильной бактериальной петлей взять культуру анаэробов из среды Китта-Тароцци или каплю исследуемого материала и засевают одну половину агара.
| Шаг 4
Простерилизовать бактериальную петлю, взять культуру аэробов, например кишечной палочкой (Escherichia coli) и засеять другую половину питательного агара.
| Шаг 5
Засеянные чашки Петри закрывают, инкубируют в анаэробных условиях: в СО2 инкубаторе, в эксикаторе или анаэростате при температуре 370С на 24-48 часов.
| Шаг 6
Второй день. Просматривают посевы, выделяют подозрительные колонии в зоне роста анаэробных бактерий.
| Шаг 7
Мазки окрасить по Граму, промикроскопировать
| Шаг 8
Результат. Под микроскопом в мазках видны крупные споровые грамположительные палочки
| Станция 11 «ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ АЭРОБОВ (1 - 2 ДЕНЬ ИССЛЕДОВАНИЯ)»
Шаг 1
Первый день: Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки, остудить, внести в пробирку с исследуемым материалом, прикоснутся кончиком петли к материалу
|
| Шаг 2
левой рукой приоткрывают один край чашки, вводят петлю внутрь
|
| Шаг 3
у противоположного края делают петлей несколько штрихов в одном месте
|
| Шаг 4
петлю отрывают и засевают материал параллельными штрихами от одного края чашки к другому с интервалом 5-6 мм.
|
| Шаг 5
Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки и поставить в штатив. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37°С в течение 18-24 часов.
|
| Шаг 6
Второй день: Изучение культуральных признаков: описать выросшие колонии
|
| Шаг 7
Изучение морфологических признаков: Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки, остудить и из ½ колонии приготовить фиксированный мазок, окрасить по Граму, микроскопировать, определить форму микроорганизма и расположение бактерий, тинкториальные признаки.
|
| Шаг 8
Выделение чистой культуры – Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки, остудить, оставшуюся ½ колонии пересеять на скошенный агар.
|
| Шаг 9
Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки и поставить в штатив
|
| Шаг 10
Посевы инкубируют в термостате при 37С 18 – 24ч.
|
|
Станция 12 «ВЫДЕЛЕНИЕ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ АЭРОБОВ (3 - 4 ДЕНЬ ИССЛЕДОВАНИЯ)»
Шаг 1
Третий день: Изучение чистоты выделенной на скошенном агаре культуры: приготовить фиксированный мазок, окрасить по Граму, микроскопировать, определить форму и расположение микроорганизмов,
тинкториальные свойства.
|
| Шаг 2
Изучение биохимических признаков: выбрать тесты для идентификации, произвести постановку этих тестов.
|
| Шаг 3
Постановка теста на чувствительность выделенной культуры
к антибиотикам
|
| Шаг 4
Четвертый день: Идентификация выделенной культуры: учет результатов тестов.
|
| Шаг 5
Учет результатов определения чувствительности выделенной культуры
к антибиотикам
|
| Шаг 6
Заполнение и выдача результата бактериологического исследования и антибиотикограммы.
|
|
Станция 13 «Выделение чистой культуры анаэробов (1-2 день исследования)»
Шаг 1
Пробирку со средой Китта-Тароцци прогреть на кипящей водяной бане в течение 10-20 мин, охладить до 30-370С.
| Шаг 2
Простерилизовать бактериальную петлю в пламени горелки.
| Шаг 3
Стерильной бактериальной петлей взять каплю исследуемого материала.
| Шаг 4
Засевают в пробирку со средой Китта-Тароцци.
| Шаг 5
Инкубация в анаэробных условиях: в СО2 инкубаторе, в эксикаторе или анаэростате при температуре 370С на 24-48 часов.
| Шаг 6
Второй день. Просматривают посевы, при помутнении среды с придонным ростом бактерий и газообразовании приготовить мазки.
| Шаг 7
Мазки окрасить по Граму, микроскопия
| Шаг 8
Результат микроскопии. Под микроскопом в мазках видны крупные споровые грамположительные палочки
| Шаг 9
Пересев материала с Китта-Тароцци на кровяной сахарный агар и в столбик сахарного питательного агара в пробирке, железосульфитный агар (среда Вильсон-Блера).
| Шаг 10
Посевы инкубируют в анаэробных условиях: в СО2 инкубаторе, в эксикаторе или анаэростате при 370С в течение 48-72 часов.
| Станция 14 «Выделение чистой культуры анаэробов (3-4-й день исследования)»
Шаг 1
Просмотр выросших колоний на кровяном сахарном агаре, высоком столбике сахарного агара в пробирке и Вильсон-Блера среде после инкубации.
| Шаг 2
Пересев типичных колоний на среду Китта-Тароцци или тиогликолевую среду (получение чистой культуры).
| Шаг 3
Инкубация в строго анаэробных условиях в термостате при 370С в течение 24-48 часов.
| Шаг 4
После инкубации идентификация чистой культуры по биохимическим признакам традиционными методами или с помощью тест-систем для определения специфических бактериальных ферментов или метаболитов.
| Шаг 5
Определение продукции факторов вирулентности: серологическая идентификация экзотоксинов в реакции нейтрализации
| Шаг 6
Определение чувствительности к антибиотикам в строго анаэробных условиях.
| Шаг 7
Окончательный результат.
| Станция 15 «Определение чувствительности к антибиотикам диско-диффузионным методом»
Шаг 1
Градуированной пипеткой внести на поверхность питательной среды взвесь микроорганизмов в объеме 0,5 мл. Использованную пипетку поместить в дезинфицирующий раствор
| Шаг 2
Стерильным бактериологическим шпателем распределить по поверхности агара. Использованный шпатель поместить в дезинфицирующий раствор
| Шаг3
Приоткрытые чашки подсушить в течение 10 мин.
| Шаг 4
Стерильным пинцетом внести диски с антибиотиками, не более 6 дисков на чашку диаметром 100 мм. Расстояние между дисками 20 мм
| Шаг 5
Инкубация в термостате при 37ºС в течение 18-24 часа
| Шаг 6
Учет результатов. При положительном результате вокруг диска с антибиотиком будет зона задержки роста микроорганизмов. При отрицательном результате вокруг дисков зона задержки роста микроорганизмов не будет
|
Станция 16 «Ориентировочная агглютинация на стекле»
Шаг 1
На поверхности обезжиренного стекла карандашом на расстоянии друг от друга нарисовать 3 кружочка
| Шаг 2
В 1-ый и 2-ой кружок внести по 1 капле диагностической агглютинирующей сыворотки стерильной пипеткой. В 3-ий кружок внести 1 каплю физиологического раствора
| Шаг 3
Бактериологическую петлю простерилизовать над пламенем горелки, остудить, взять с поверхности агара культуру, внести в 1-ую каплю, размешать круговыми движениями.
| Шаг 4
Бактериологическую петлю простерилизовать над пламенем горелки, остудить, взять с поверхности агара культуру, внести в 3-ю каплю с физиологическим, размешать круговыми движениями.
| Шаг 5
Бактериологическую петлю простерилизовать, поставить в штатив.
| Шаг 6
Инкубация при комнатной температуре 2-5 мин. Учет результатов. При положительном результате в 1-ой капле будет видны хлопья агглютината, вторая капля (отрицательный контроль) прозрачная, 3 3-ей капле (контроль антигена) равномерная муть.
| Станция 17 «Развернутая реакция агглютинации при бруцеллезе (Реакция Райта)»
Шаг 1
В стерильную пробирку внести 2,4 мл 0,9% р-ра натрия хлорида, добавить 0,1 мл исследуемой сыворотки (рабочее разведение сыворотки). Инактивировать на водяной бане при температуре 560С в течение 30 мин;
| Шаг 2
закапать в пробирку 4 капли 50% формалинизированных эритроцитов и поставить в термостат на 30 минут или при комнатной температуре на 1 час, или на ночь в холодильник.
| Шаг 3
Центрифугировать при 2000 об/мин в течение 15 минут.
| Шаг 4
Установить в штатив 7 пустых пробирок (5 из них опытные, остальные контрольные: КС - контроль сыворотки, КД - контроль диагностикума). Подписать на пробирках номер и разведение сыворотки.
| Шаг 5
Внести, начиная со 2-й пробирки, во все по 0,5 мл 0,9% раствора хлорида натрия.
| Шаг 6
Внести в 1-ю, 2-ю и в контроль сыворотки по 0,5 мл рабочего разведения сыворотки.
| Шаг 7
Исследуемую сыворотку титровать, перенести по 0,5 мл из пробирки в пробирку, из 5-ой пробирки 0,5мл выливают в дез. раствор Таким образом получают ряд двухкратных разведений сыворотки: 1:100, 1:200, 1:400, 1:800.
| Шаг 8
Затем во все пробирки, кроме КС, добавить по 0,5 мл диагностикума бруцеллезного.
| Шаг 9
Приготовить рабочее разведение диагностикума: развести до рабочего титра 1:10 (0,4 мл концентрированного диагностикума + 3,6 мл 0,9% р-ра натрия хлорида)- контроль диагностикума.
| Шаг 10
Тщательно встряхнуть пробирки, поставить в термостат при 370С на 24 часа.
| Шаг 11
Произвести учет результатов реакции: положительный результат реакции агглютинации характеризуется образованием на дне пробирки крупно-хлопчатого осадка с прозрачной надосадочной жидкостью.
|
Станция 18 «Реакция связывания комплемента (РСК) – реакция Вассермана»
Шаг 1
Подготовить ингредиенты реакции: антиген 1 – неспецифический антиген (липиды из мышцы сердца быка), 2 и 3 – специфические антигены трепонемы, инактивированная исследуемая сыворотка, изотонический раствор хлорида натрия, комплемент в рабочей дозе, гемолитическая система и пронумеровать 4 пробирок (1-я, 2-я, 3-я, 4-я (контроль)).
| Шаг 2
Внесение исследуемой сыворотки во все пробирки по 0,1 мл.
| Шаг 3
Внесение изотонического раствора натрия хлорида по 0,4 мл в 1-, 2- и 3-ю пробирки и по 0,9 мл в 4-ю пробирку.
| Шаг 4
Внесение 0,5 мл неспецифического антигена 1 в 1-ю пробирку
| Шаг 5
Внесение 0,5 мл специфического антигена 2 во 2-ю пробирку
| Шаг 6
Внесение 0,5 мл специфического антигена 3 во 3-ю пробирку
| Шаг 7
Внесение комплемента по 0,5 мл во все пробирки, гомогенизировать.
| Шаг 8
Инкубация в термостате при 370С в течение 45 мин.
| Шаг 9
Добавление гемолитической системы по 1,0 мл во все пробирки. Встряхивают и выдерживают 40-60 мин при 370С в термостате
| Шаг 10
Учет результатов. В первых трех пробирках «положительная реакция» +++ - полная задержка гемолиза (жидкость в пробирке бесцветна и эритроциты оседают на дно. «отрицательная реакция» «-» - гемолиз (полный лизис эритроцитов, жидкость окрашена (лаковая кровь)).
|
Станция 19 «Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) при диагностике хламидийной инфекции»
Шаг 1
На поверхности обезжиренного стекла карандашом нарисовать кружок диметром 15-20 мм
| Шаг 2
В центр кружочка вносят материал больного петлей круговыми движениями.Бактериологическую петлю простерилизовать, поставить в штатив.
| Шаг 3
Мазок подсушивают над пламенем горелкив теплой струе воздуха до полного высыхания
| Шаг 4
На подсушенный мазок вносят 2-3 капли диагностической сыворотки против хламидий
| Шаг 5
Инкубация в влажной камере в термостате при 37˚С 30 мин
| Шаг 6
Промывают препарат промывочным раствором
| Шаг 7
На мазок вносят 2-3 капли антивидовой флюоресцирующей сыворотки
| Шаг 8
Инкубация в термостате при 37˚С 30 мин
| Шаг 9
Промывают препарат промывочным раствором
| Шаг 10
Вносят 1 каплю иммерсионного масла, микроскопируют.
Учет результатов: при положительном результате в мазке будет обнаруживаться зеленовато желтое свечение на темном фоне. При отрицательной реакции все поля зрения при микроскопии будут темными без свечения.
|
Станция 20 «РПГА при определении HBs антигена вируса гепатита В»
Шаг 1
Приготовить рабочее разведение исследуемой сыворотки 1:5: в стерильную пробирку градуированной пипеткой внести 1 мл исследуемой сыворотки и 4 мл стерильного физиологического раствора, перемешать пипетированием
| Шаг 2
В 6 лунок внести физиологический раствор 1 мл и отдельно в 2 лунки для контролей
| Шаг 3
Градуированной пипеткой набрать 1 мл из разведения 1:5 и внести в 1-ую лунку перемешать пипетированием. Над лункой подписать разведение 1:10
| Шаг 4
Взять новую градуированную пипетку, набрать 1 мл смеси из 1-ой лунки и внести во 2-ую лунку перемешать пипетированием. Над лункой подписать разведение 1:20.
| Шаг5
Взять новую градуированную пипетку, набрать 1 мл смеси из 2-ой лунки и внести во 3-ю лунку перемешать пипетированием. Над лункой подписать разведение 1:40.
| Шаг 6
Взять новую градуированную пипетку, набрать 1 мл смеси из 3-ей лунки и внести во 4-ю лунку перемешать пипетированием. Над лункой подписать разведение 1:80.
| Шаг 7
Взять новую градуированную пипетку, набрать 1 мл смеси из 4-ой лунки и внести во 5-ю лунку перемешать пипетированием. Над лункой подписать разведение 1:160.
| Шаг 8
Взять новую градуированную пипетку, набрать 1 мл смеси из 5-ой лунки и внести во 6-ую лунку перемешать пипетированием. Над лункой подписать разведение 1:320.
| Шаг9
Взять новую градуированную пипетку, набрать 1 мл рабочего разведения сыворотки 1:5 внести в 1-ую контрольную лунку перемешать пипетированием
| Шаг10
Взять новую градуированную пипетку, внести в каждую лунку по 0,5 мл взвеси эритроцитарного антительного HBs-диагностикума, кроме контрольных.
| Шаг 11
Взять новую градуированную пипетку, набрать 0,5 мл взвеси эритроцитарного антительного HBs-диагностикума внести в 2-ую контрольную лунку перемешать пипетированием с физиологическим раствором
| Шаг 12
Инкубирование в термостате при 37˚С 60 мин.
| Шаг 13
Учет результатов: при положительной реакции на дне лунок образуется мелкозернистый осадок по всей поверхности в виде «зонтика». При отрицательном результате осадок с ровными краями, в виде «пуговки»
|
Станция 21 «ИФА - определение антител против ВИЧ»
Шаг 1
В три лунки микропланшета внести исследуемую сыворотку
| Шаг 2
В следующий ряд в три лунки внести сыворотку с антителами к ВИЧ (положительный контроль)
| Шаг3
В следующий ряд в три лунки внести сыворотку без антител к ВИЧ (отрицательный контроль)
| Шаг 4
Инкубация в термостате при 37ºС в течение 1 часа
| Шаг 5
Промыть все лунки промывочным раствором 5 раз
| Шаг 6
Внести во все лунки антиглобулиновую сыворотку меченную ферментом пероксидазой (конъюгат)
| Шаг 7
Инкубация в термостате при 37ºС в течение 1 часа
| Шаг 8
Промыть все лунки промывочным раствором 5 раз
| Шаг 9
Внести во все лунки субстрат для фермента пероксидазы - хромоген
| Шаг 10
Инкубация в термостате при 37ºС в течение 30минут
| Шаг 11
Внести во все лунки стоп реагент
| Шаг 12
Анализ оптической плотности раствора в микропланшетев считывающих аппаратах – риддеры. При положительной реакции раствор в лунках окрашивается в желтый цвет, при отрицательной реакции – бесцветная. Окончательные результаты выдает риддер – цифровые показатели оптической плотности раствора в лунках
|
Станция 22 «ПОСТАНОВКА АЛЛЕРГИЧЕСКОЙ ПРОБЫ В ДИАГНОСТИКЕ ТУБЕРКУЛЕЗА» Шаг 1
обработать кожу тампоном, смоченным 70%-м этиловым спиртом, затем другим тампоном, смоченным 1-2%-м раствором йода или другим дезинфектантом, разрешенным к применению для этих целей в установленном порядке, круговыми движениями, начиная от центра, в течение 30 с. (средняя треть предплечья);
|
| Шаг 2
Положите шарик в лоток для использованного материала.
|
| Шаг 3
Возьмите стерильный сухой ватный шарик. Положите его под 5 палец левой руки.
|
| Шаг 4
Возьмите шприц в правую руку срезом иглы и шкалой вверх.
|
| Шаг 5
Захватите кистью левой руки предплечье ребенка, и пальцами натяните кожу снизу.
|
| Шаг 6
Введите в кожу только срез иглы, держа шприц почти параллельно коже.
|
| Шаг 7
Зафиксируйте первым пальцем левой руки муфту иглы, прижав ее к коже.
|
| Шаг 8
Перенесите на поршень правую руку и, надавливая на поршень введите туберкулин. Внимание! в месте инъекции должен образоваться беловатый бугорок в виде «лимонной корочки» 4-5 мм в диаметре.
|
| Шаг 9
Извлеките иглу, не прижимая место инъекции сухим шариком
|
| Шаг 10
Пригласить пациента через 48 – 72 ч. Для учета результатов.
|
| Станция 23 «Забор проб испражнений для исследований на патогенную микрофлору» Шаг 1
Взять стерильную пробирку со средой накопления и стерильной ректальной петлей.
|
| Шаг 2
Больного уложить на кушетку на правый бок, ноги подтянуты к животу (согнуты в коленях).
|
| Шаг 3
Ректальную петлю вынуть из пробирки и ввести в прямую кишку вглубь на 5-8 см.
|
| Шаг 4
Ректальную петлю осторожно вынуть из прямой кишки и опустить в пробирку со средой обогащения.
|
| Шаг 5
Подписать пробирку: указать Ф.И.О., возраст, домашний адрес обследуемого, диагноз
|
| Станция 24 «Забор проб испражнений для исследования на дисбактериоз» Шаг 1
Подготовить стерильную баночку с лопаточкой для забора испражнений.
|
| Шаг 2
Непосредственно перед заборам материала (кала, испражнений) открыть баночку.
|
| Шаг 3
Забор испражнений (не менее 1,0 грамма) производят из нескольких мест лопаточкой, которая находится в баночке.
|
| Шаг 4
Лопаточку с фекалиями опускают в баночку, закрывают крышкой
|
| Шаг 5
Подписать баночку: указать Ф.И.О., возраст, домашний адрес обследуемого, диагноз
|
| Станция 25 «Забор отделяемого открытых инфицированных ран для микробиологических исследований» Шаг 1
Кожу вокруг раны предварительно обрабатывают спиртом (70%) или другим антисептиком.
|
| Шаг 2
Некротические массы, детрит, гной удаляют стерильной салфеткой.
|
| Шаг 3
Взятие материала (раневого отделяемого) проводится круговыми движениями стерильным тампоном от центра к периферии раны.
|
| Шаг 4
Раневое отделяемое на тампоне асептически переносится в пробирку с транспортной средой.
|
| Шаг 5
Подписать пробирку: указать Ф.И.О., возраст, домашний адрес обследуемого, диагноз
|
| Станция 26 «Забор мочи для микробиологических исследований» Шаг 1
провести предварительный туалет наружных половых органов
|
| Шаг 2
Попросить обследуемого выпустить небольшое количество мочи в мочеприемник или другую емкость
|
| Шаг 3
Затем произвести забор средней порции свободно выпущенной мочи, в количестве 3-5 мл в стерильную посуду (полимерную банку) с плотно прикручивающейся крышкой
|
| Шаг 4
Подписать баночку: указать Ф.И.О., возраст, домашний адрес обследуемого, диагноз
|
|
Станция 27 «ПОСЕВ КРОВИ НА СТЕРИЛЬНОСТЬ»
Шаг 1
обработать кожу тампоном, смоченным 70%-м этиловым спиртом, затем другим тампоном, смоченным 1-2%-м раствором йода или другим дезинфектантом, разрешенным к применению для этих целей в установленном порядке, круговыми движениями, начиная от центра, в течение 30 с.;
|
| Шаг 2
Стерильным шприцем произвести венепункцию
|
| Шаг 3
Произвести забор крови (5 мл) в шприц
|
| Шаг 4
над пламенем спиртовки открыть флакон с двухфазной средой
|
| Шаг 5
внести кровь во флакон из шприца, предварительно сняв иглу
|
| Шаг 6
обжечь горлышко и пробку флакона в пламени спиртовки, закрыть флакон пробкой
|
| Шаг 7
осторожно, чтобы не замочить пробку флакона, перемешать его содержимое круговыми движениями.
|
|
|